用恒温培养箱进行生鲜牛乳中体细胞的测定
2019-04-17 14:42 0次
用恒温培养箱进行生鲜牛乳中体细胞的测定
1.原理
1.原理
将测试的生鲜牛乳涂抹在载玻片上成样膜，干燥、染色，显微镜下对细胞核可被亚甲基蓝清晰染色的细胞计数。
2.试剂
除非另有说明，在分析中仅使用化学纯和蒸馏水。
2.1乙醇，95%。
2.2四氯乙烷(Cz Hz Cl 4) 或三氯乙烷(C zHy Cl 3) 。
2.3亚甲基蓝(Ci6HisCIN3S·3H2O) 。
2.4冰醋酸(CH3COOH) 。
2.5硼酸(H3BO3)。
3.仪器
3.1显微镜：放大倍数x500或×1000，带刻度目镜、测微尺和机械台。
3.2微量注射器：容量0.01mLc
3.3载玻片：具有外槽圈定的范围，可采用血球计数板。
3.4水浴锅：恒温65℃±5℃。
3.5水浴锅：恒温35℃±5℃。
3.6电炉：加热温度40℃±10℃。
3.7砂芯漏斗：孔径≤10pm。
3.8干发型吹风机。
3.9恒温培养箱：恒温40℃~45℃。
4.染色溶液制备
在250mL三角瓶中加人54.0mL乙醇和40.0mL四氯乙烷，摇匀；在65℃水浴锅中加热3min， 取出后加入0.6g亚甲基蓝， 仔细混匀； 降温后， 置人冰箱中冷却至4℃；取出后，加入6.0mL冰醋酸，混匀后用砂芯漏斗过滤；装人试剂瓶，常温贮存。
4.1采集的生鲜牛乳应保存在2℃~6℃条件下。若6h内未测定，应加硼酸防腐。硼酸在样品中的浓度不大于0.6g/100mL，贮存温度2℃~6℃，贮存时间不超过24h。
4.2将生鲜牛乳样在35℃水浴锅 中加热5min， 摇匀后冷却至室温。
4.3用乙醇将载玻片清洗后，用无尘镜头纸擦干，火焰烤干，冷却。
4.4用无尘镜头纸擦净微量注射器针头后抽取0.01mL试样，用无尘镜头纸擦干微量注射器针头外残样。将试样平整地注射在有外围的载玻片上，立刻置于恒温培养箱中，水平放置5mmin， 形成均匀厚度样膜。在电炉 上烤干， 将载玻片上干燥样膜浸入染色溶液 中，计时10min， 取出后凉干。若室内湿度大， 则可用干发型吹风机吹干； 然后， 将染色的样膜浸入水中洗去剩余的染色溶液，干燥后防尘保存。
5.测定
5.1将载玻片固定在显微镜的载物台上，用自然光或为增大透射光强度用电光源、聚光镜头、油浸高倍镜。
5.2单向移动机械台对逐个视野中载玻片上染色体细胞计数，明显落在视野内或在视野内显示一半以上形体的体细胞被用于计数，计数的体细胞不得少于400个。
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