主要讲下用恒温培养箱进行抑菌测试：

抑菌圈法

(1)依次准确称取3g牛肉膏、10g蛋白冻、5gNaCl、15g～20g琼脂放入烧杯中。在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到1L。在未调节pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸性，用滴管向培养基中逐滴加入lmol/LNaOH溶液，边加溶液边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达到7.6。反之，用lmol/LHCl进行调节。

(2)按实验要求，可将配制的培养基分装入锥形瓶和试管内。培养基分装完毕后，在锥形瓶口和试管口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。加塞后，将全部锥形瓶和试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

(3)将上述培养基以0.103MPa，121℃，20min高压蒸汽灭菌。将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在试管架上，搁置的斜面长度不超过试管总长的一半为宜。将灭菌培养基放入37℃的温室中培养24h，以检查灭菌是否彻底。制得斜面培养基若干，供接种培养细菌备用。

(4)将细菌接种在斜面培养基上，在37℃下培养16-24h后转接一次，在37℃下培养16-20h。

(5)将培养皿、试管、镊子、玻璃杯、玻璃棒、移液管等经清洗后放入电热恒温干燥箱烘干杀菌，在160℃下灭菌2h。

(6)依次取无菌磷酸盐缓冲液10mL放入灭菌的试管中，在斜面培养基上取一环菌放入第一个试管中混匀后取出1mL放入第二个试管，此时菌液浓度为10，如此反复进行，使菌液浓度稀释至10%。

(7)取1mL10菌液滴入到已灭菌的平皿中，取冷却至50℃左右的营养琼脂20mL左右倒入平皿中并与菌液混匀。

(8)待营养琼脂凝固后，取压制成形的抗菌样品放入平板中央(以不破坏琼脂平板为宜)，把培养基放入紫外灯下光照1h，培养基和紫外灯的距离大约20cm。

(9)将光照后的培养基放入37℃恒温培养箱中倒置培养24h后观察抑菌圈大小，按互成45℃的4个直径方向测量透明抑菌圈直径，计算平均值。