喆图小编在日常处理客户的案例中发现，关于用厌氧培养箱AKK菌种的复苏培养有下列问题是客户经常问到的，下面就跟大家来做一一解答：

1、购买的CICC的akk菌，按说明书要求配制了巧克力血平板，同时也按照部分文献参数配制了含L-苏氨酸及N-乙酰-D-氨基葡萄糖的改良BHI液体培养基。
答：CICC的菌种还是比较靠谱的，培养基推荐用硫乙醇酸盐流体培养基(FT)。刚开始不建议养这么难养的厌氧菌，先用金葡或者大肠练练手。
2、将菌粉用无菌生理盐水溶解后，各板/管加入50或100 uL菌液，平板涂布、试管混匀后分两批，分别放入37℃厌氧培养箱中
答：AKK是严苛厌氧菌，所有接触的水溶液最好都做驱氧处理，溶解氧会杀死菌株。
3、菌粉冻干管之前一直按说明书要求4℃保存，但距现在使用时已有3个多月，菌是否可能已死亡？
答：冻干粉状态可以保存很久，十年八年死不了。
4、说明书提示要用巧克力平板复苏，按配方溶解琼脂灭菌后，80-90℃加入无菌脱纤维羊血，继续酒精灯上摇匀5min左右，但发现琼脂内部还是存在细微的血凝块样物质（直径≤1mm），不像有些巧克力血平板那样质地均匀，这个巧克力血平板是不是做翻车了？做了2批都是这样
答：血平板可以找试剂商购买成品的，便宜还质量可靠，比自己做划算。
5、目前巧克力血平板表面未见菌落，但不知道有没有菌膜生成，背景色太深看不清楚。操作时加的50或100uL菌是不是太多了？导致没有单个菌落生成
答：涂布的话很难有单菌落生成，如果为了纯化，请划线来获得单菌落。
6、说明书对时间说明有点笼统，只提到“菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌 7-10天”，并未细化。看到文献提到用BHI培养基复苏三至七天的都有，我目前在厌氧培养箱中培养时间48h是不是短了，得继续等等看？但是万一等到7天都没有是不是就实锤翻车了？
答：AKK是细菌，正常48小时就长好了，除非生长条件不合适。可以再等等
7、唯一的BHI浑浊飘絮可能是污染吗？
答：是否污染需要检测，从培养时间上看不会是真菌污染，可以取部分菌液出来，非厌氧环境中观察菌是否会继续增殖或者死亡。